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Fisher细胞爬片的组织取材与制作方法点击次数:211 发布时间:2018-08-06

Fisher细胞爬片组织取材
1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后,再进行后固定。
2、组织取材注意事项:
(1)标本新鲜:组织要求离体后30min~2h内浸入固定液,尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。
(2)注意防止人为因素的影响刀和剪要快,避免挤压。
(3)组织块的大小 厚为0.1~0.3cm,大小可根据需要而定。

Fisher细胞爬片的制作方法
1.爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片。
2.应用盖玻片,可根据自己的需要剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板;裁剪时可用前护士输液用于打开玻璃安瓶的小沙轮,或者是口腔科的那种小沙轮,轻轻划一下后,稍用力一掰就分开了。如果接种大皿的话,一般不将盖玻片切开,直接清洁后放入培养皿中,到染色时再将之切开,这样既保证了细胞均一性,又可同时做几个指标的染色。
3.将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再置于无水酒清中浸泡6小时,再用三蒸水冲洗3遍,放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒。
4.高压后取出放入烤箱中烤干,备用。烤干后可放入超净台中。
5.关于多聚赖氨酸,很多人都将玻片用此处理,以使细胞与玻片结合更牢。但我在做爬片时从来没用过多聚赖氨酸,细胞贴壁仍然很好,且在做后续的免疫细胞化学染色、tunel等凋亡检测、免疫荧光等也从未脱过片。
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